Tuvieron un único hijo:
• Carlos de Austria .
Su segundo matrimonio fue el 25 de Julio de 1554 con María I de Inglaterra , en Winchester.
• No tuvieron hijos .
Su tercer matrimonio fue el 22 de junio de 1559 con Isabel de Valois .
Tuvieron dos hijas:
• Isabel Clara Eugenia .
• Catalina Micaela .
Su cuarto matrimonio fue el 12 de noviembre de 1570 con Ana de Austria .
Tuvieron cuatro hijos y una hija:
• Fernando .
• Carlos Lorenzo .
• Diego Félix .
• Felipe .
• María .
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